蜀科低速冷凍離心機對組織樣品的前處理
時間：2017-08-02
|
來源：四川蜀科儀器有限公司
蜀科低速冷凍離心機在實驗室樣品前處理中有重要的作用。今天我們來了解一下前處理的過程。
一、勻漿介質的制備
一般采用pH7.4，0.01mol/L Tris-HCl，1mmol/L EDTA-2Na，0.01mol/L蔗糖，0.8%氯化鈉溶液或直接用0.86%的生理鹽水作為勻漿介質。
一般采用pH7.4，0.01mol/L Tris-HCl，1mmol/L EDTA-2Na，0.01mol/L蔗糖，0.8%氯化鈉溶液或直接用0.86%的生理鹽水作為勻漿介質。
二、組織勻漿的制備
1、取組織塊（0.1g～0.2g）最少可到2～5mg在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，準確稱重，放入5ml的勻漿管中。
2、按重量(g):體積(ml)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質（pH7.4，0.01mol/L Tris-HCl，1mmol/LEDTA-2Na，0.01mol/L蔗糖，0.8%的氯化鈉溶液）或者0.86%的生理鹽水于勻漿管中，冰水浴條件下，用眼科小剪盡快剪碎組織塊。
3、勻漿的方式有多種：手工勻漿，機器勻漿，超聲粉碎。
①手工勻漿：左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉動研磨數十次（6～8分鐘），充分研碎，制成10%的勻漿液。
②機器勻漿：用組織搗碎機10000～15000轉/分上下研磨制成10%組織勻漿，也可用內切式組織勻漿機制備（勻漿時間10秒/次，間隙30秒，連續3～5次，在冰水中進行），皮膚、肌肉組織等可延長勻漿時間。
③超聲粉碎：用超聲粉碎機進行粉碎，可用Soniprep150型超聲波發生器以振幅14微米超聲處理30秒使細胞破碎，也可用國產超聲波發生儀，用400安培，5秒/次，間隙10秒反復3～5次。
鏡檢觀察:取少量組織勻漿作涂片（直接涂片、染色均可以），顯微鏡下觀察細胞是否破碎，若沒有則可延長勻漿時間。
4、將制備好的10%勻漿液用蜀科低速冷凍離心機2500轉/分左右，離心10～15分鐘，取上清液進行測定.
三、樣本保存
動物組織樣本暫時不測定，可立即低溫凍存，溫度越低越好，中間如不反復凍融，-20℃以下可保存三個月，-70℃以下可保存六個月。
動物組織樣本暫時不測定，可立即低溫凍存，溫度越低越好，中間如不反復凍融，-20℃以下可保存三個月，-70℃以下可保存六個月。
制備好的勻漿液建議不要凍存，最好當天進行測定，如放置時間過長相關酶活會有所下降，部分指標4℃可存放3～5天(如SOD要存放2～3天，MDA可存放3～5，總蛋白測定可存5～7天等)。
- 上一篇：蜀科臺式低速離心機制備大腸桿菌感受態細胞
- 下一篇：蜀科低速離心機分離廚廢油脂
熱門產品推薦：
