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蜀科臺式低速離心機制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞
時間：2017-08-01
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來源：四川蜀科儀器有限公司
蜀科臺式低速離心機操作簡單、運行平衡、性能穩(wěn)定、安全可靠，廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)，放射免疫、生物化學(xué)、食品衛(wèi)生、環(huán)保等科研領(lǐng)域。今天來科普一下如何用蜀科臺式低速離心機制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，給各位實驗室的朋友參考。
1.首先將受體大腸桿菌接種于LB培養(yǎng)基中活化，置于恒溫培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)過夜。。。
2.接著取一丁點（槍頭沾一下）上述大腸桿菌培養(yǎng)物菌落接種于3-5毫升LB試管中，于恒溫振蕩器上，37℃振蕩培養(yǎng)過夜（約12-16 小時）。
4.再是用移液管無菌條件下，取過夜培養(yǎng)液1 毫升，接種于新鮮的LB 中（100毫升LB/250毫升三角瓶，接種量按菌液濃度而定，一般在1%左右），于恒溫振蕩器上37℃培養(yǎng)2―3 小時。
5.無菌條件下將上述1 毫升菌液倒入1.5毫升EP 管中（離心管應(yīng)帶蓋并高壓滅菌過），每組2支。
6、帶菌液的離心管置于冰上10 分鐘，冷卻菌液，平衡好，置于蜀科臺式低速離心機上，3500r/min 離心5 分鐘。
7、無菌條件下，倒去上清LB，倒斜離心管，讓LB 流干，留下沉淀菌體，加入預(yù)冷的100mmol/L CaCl2溶液600微升，用微量取樣器輕輕吸沖底部沉淀菌體，使其懸浮后，把2支管轉(zhuǎn)為1支，搖勻后于冰浴中放置30分鐘。
8、重新將CaCl2 菌懸浮液置于蜀科臺式低速離心機上，3500r/min離心10分鐘，小心側(cè)倒掉上清CaCl2 ，留沉淀菌體。
9、再把菌體懸浮在200 微升100mmol/L CaCl2 的溶液中，置于冰上作為轉(zhuǎn)化的受體菌液。此制備的感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在此步后1小時至24小時內(nèi)使用，效率比較高。
10.在事先制備好的含50μg/ml Amp的LB 平板表面加40ml X-gal 儲液和4μl IPTG儲液,用無菌玻棒將溶液涂勻,置于37℃下放置3-4小時,使培養(yǎng)基表面的液體完全被吸收，備用。
上面的應(yīng)用對大家有幫助嗎？操作中的蜀科TD-5Z臺式低速離心機榮獲2016“國產(chǎn)好儀器”殊榮，是國內(nèi)各大實驗室、醫(yī)院、生物科技、食品環(huán)保等單位必備的儀器。如果您也有需要，趕快聯(lián)系我們吧！
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