人類的動脈硬化、炎癥、糖尿病、癌癥等多種疾病和衰老等被證實與活性氧和自由基有關(guān).接下去以葡萄為原料，研究天然發(fā)酵過程中還原力、DPPH自由基、羥基自由基、超氧自由基和ABTS自由基清除能力的變化，其中蜀科立式高速離心機又發(fā)揮了強大的作用。

  首先進行葡萄酵素的制備。用無菌水在無菌條件下 輕輕沖洗除去葡萄表面沙子和灰塵，在無菌操作臺中自然晾干。紅糖用紫外殺菌45min。葡萄與紅糖按質(zhì)量比1∶1加入到已滅菌的玻璃瓶中，封口，放在暗處，常溫下發(fā)酵56d。為了避免潛在的菌體污染，制備過程中所有操作都在無菌條件下進行。在發(fā)酵過程中，每隔8d取樣，樣品經(jīng)蜀科高速離心機 10000r/min離心10min后，用于測定。

總酚含量測定

[8]

100

μ

L

樣品加入到

45.9

mL

去離子水

，

再加入

1

mL

Folin-Ciocalteau

試

劑

，

反應

3

min

，

最后加入

3

mL

20%

的碳酸鈉溶

液

，

25

°

C

恒溫水浴振蕩

2

h

，

在

760

nm

波長處測

定吸光度

，

以去離子水為參比溶液

。

總酚含量以沒

食子酸等價物表示

，

按照標準曲線線性方程

y

=0.

0917

x

+

0.0208

，

R

2

=

0.9996

來測定總酚含量

。

其

中

：

y

為吸光度

；

x

為樣品質(zhì)量濃度

（

GAE

，

μ

g/mL

總酚含量測定

  100μL樣品加入到45.9mL去離子水，再加入1mLFolin-Ciocalteau試劑，反應3min，最后加入3mL20%的碳酸鈉溶液，25°C恒溫水浴振蕩2h，在760nm波長處測 定吸光度，以去離子水為參比溶液?？偡雍恳詻]食子酸等價物表示，按照標準曲線線性方程y=0. 0917x+0.0208，R2=0.9996來測定總酚含量。其中：y為吸光度；x為樣品質(zhì)量濃度（GAE，μg/mL）

DPPH自由基清除能力

  40μL樣品加入到4mL0.1mmol/LDPPH-甲醇溶液中，再加入450μL50mmol/LTris-HClbuffer（7.4），25°C溫度下恒溫水浴30min。以去離子水為參比溶液。在517nm波長處測定吸光度（%）=[（A0-（A1-A2））/ A0]×100 （1）式中，A0———空白對照液的吸光度；A1———樣品測定管的吸光度；A2———樣品本底管的吸光度。

還原力測定

  30μL樣品加入到2.5mL 磷酸緩沖液（0.2mol/L，pH6.6），然后加入2.5mL 10g/L鐵氰化鉀，50°C反應30min，再加入0.1g/ mL三氯乙酸2.5mL，在3000r/min下再次用蜀科高速離心機離心10min，立即取2.5mL上清液，加入2.5mL去離子水和0.5mL1g/L三氯化鐵。以去離子水為參比溶 液，在700nm波長處測定吸光度。吸光度越高，還原力越強。

超氧自由基清除能力 

  50μL樣品加入到950μL磷酸緩沖液（0.1mol/LpH7.4），然后加入1mL120μmol/LPMS（用0.1mol/L的PBS，pH 7.4配制），1mL936μmol/LNADH（用0.1mol/L的PBS，pH7.4配制）和1mL300μmol/LNBT（用0.1mol/L的PBS，pH7.4配制）。在環(huán)境溫度下，反應5min。以去離子水為參比溶液。在560nm波長 處測定吸光度。 超氧自由基清除能力/%=[（A0-（A1-A2））/A0] ×100

羥基自由基清除能力

  135μL樣品加入 到1.4mL6mmol/LH2O2，然后加入0.6mL20 mmol/L水楊酸鈉和2mL1.5mmol/L硫酸亞鐵，37°C溫度下恒溫水浴1h。以去離子水為參比溶液。在562nm波長處測定吸光度。 羥基自由基清除能力/%=[（A0-（A1-A2））/ A0]×100

ABTS自由基清除能力

  用7mmol/LABTS（用5mmol/L的PBS，pH7.4配制），加入過 硫酸鉀使最終濃度為2.45mmol/L，在室溫條件下黑暗放置12~16h。使用前把ABTS自由基用PBS稀釋成在734nm波長處吸光度為0.7±0.02。 取10μL樣品加入到5mL上述稀釋液中，在 30°C溫度下反應5min。以去離子水為參比溶液。在734nm波長處測定吸光度。 ABTS自由基清除能力/%=[（A0-（A1-A2））/ A0]×100

  經(jīng)實驗研究表明，葡萄固有的多種有益菌天然發(fā)酵而產(chǎn)生的葡萄酵素產(chǎn)品具有良好的抗氧化性能?？寡趸阅茏兓?guī)律研究表明：發(fā)酵過程中總酚含量、還原力、DPPH自由基清除能力、羥基自由基清除能力和ABTS自由基清除能力總體呈逐漸增加趨勢，超氧自由基清除能力呈現(xiàn)先增加后略微降低再增加的趨勢。因此，平時可以適當食用功能性微生物發(fā)酵產(chǎn)品，可以起到一定的抗衰老，抗菌，消炎，凈化血液，增強機體免疫能力等多種保健功能。

  此實驗中，蜀科立式高速離心機發(fā)揮了強大作用，相關(guān)領(lǐng)域客戶如果對實驗中的離心機感興趣可以隨時聯(lián)系我們，我們會給您更多專業(yè)詳細的解答哦！